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明胶酶谱检测试剂盒归纳总结,仅供参考!


发布日期:[2019/6/20 14:39:06] 共阅[42]次
明胶酶谱检测试剂盒归纳总结,仅供参考!


 

信帆生物的明胶酶谱试剂盒,主要用于检测MMP2,MMP9的活性,适用样本多样,包括细胞培养液,细胞上清液,全血等样本,操作和WB免疫印迹差不多,产品现货供应!

 

本试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法,其灵敏度可达1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE 凝胶,含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳,电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer 孵育,凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶条带的位置,蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮区域,从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液,可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性,检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测,如果小胶加样孔为10~15个,则总计可检测500~750个样品。

 

MMP检测注意事项:

细胞培养基要用无血清培养基;

样本裂解时不含EDTA;

 

明胶酶谱的活性受钙离子,锌离子,和PH值等因素的影响,因此缓冲液 配制应严格准确,尽量用超纯水,孵育温度也掌握好。

 

因为检测蛋白活性,所以应尽量避免蛋白变性,我们一般都要求冰上操作,电泳也放在冰水里进行的。

 

substrateG是10×使用说明:

看老师配多少胶,比如老师用10ml的胶 ,就往里边加1ml的substrateG就可以了。将凝胶放在扫描仪上扫描。虽然MMP条带透明,但凝胶背景并非真正全黑。解决办法:可用非透射光扫描,或用软件图像处理程序调整背景显示为灰度显示,并尽量设置为黑色。MMP条带则为白色 。

明胶酶谱检测试剂盒归纳总结,仅供参考!


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