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BL21(DE3)感受态细胞新品上架,欢迎联系!


发布日期:[2019/7/11 14:31:20] 共阅[52]次
BL21(DE3)感受态细胞新品上架,欢迎联系!


产品简介:
BL21(DE3)感受态细胞是采用大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19 质粒检测,转化效率可达 107,-70℃保存 6 个月转化效率不改变。


基因型:F_ ompT hsdSB(rB_mB_)dcm gal(DE3)

特 点:该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7 启动子的表达载体(如 pET 系列)的基因。T7 噬菌体RNA 聚合酶位于 λ 噬菌体 DE3 区,该区整合于 BL21 的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。


操作方法:(以下各步骤均为无菌操作)

1、将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以 100ul 感受态细胞为例。

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA,注意目的 DNA 的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置 30 分钟。
 
3、将离心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒,然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟,注意不要摇动离心管。

4、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的 SOC 或 LB 培养基,37℃ 180rpm 振荡培养 1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
 
5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板,37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的 DNA 总量较多,可取 100ul 左右的转化产物涂板;反之,如转化的 DNA总量较少,可取 200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

BL21(DE3)感受态细胞新品上架,欢迎联系!


注意事项:
 
1、感受态细胞应保存在-70℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。
 
2、实验过程中应严格无菌操作,防止其它 DNA 或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3、转化时,转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分。
 
4、转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
 
5、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到*。


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